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動物哮喘模型

簡要描述：動物哮喘模型：是達為科生物較為成熟的動物模型之一，由動物平臺經(jīng)驗豐富的實驗員操作完成。

更新時間：2023-06-29
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BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2 mg/mL)和DBP溶液（0.5 mg/kg），第21~23天連續(xù)3天以0.5%的OVA溶液霧化激發(fā)，每天于上午下午固定時間霧化2次，每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化，后一次霧化結束后24小時，小鼠摘眼球取血，取支氣管肺泡灌洗液( Bronchial Alveolar Lavage, BALF )及肺組織。
一般行為學觀察  觀察小鼠在霧化過程中是否出現(xiàn)撓臉、毛發(fā)豎立、呼吸急促、煩躁不安、大小便失禁等現(xiàn)象。
血中Eos計數(shù) 后一次霧化激發(fā)結束24h后，小鼠摘眼球取血，獲得血液后立即取出20 μl與380μl 嗜酸性粒細胞稀釋液混勻，利用細胞計數(shù)板于光學顯微鏡下進行Eos計數(shù)。
血清中IgE測定將獲得的血液靜置2h后，離心，3500 rpm，15min，取血清，按IgE ELISA試劑盒說明書進行測定，并通過樣本總蛋白含量進行結果校正。
BALF細胞分類計數(shù)  將小鼠仰臥位固定，打開胸腔后，結扎右肺及左側肺上葉。分離并暴露氣管，用適宜針頭進行氣管插管，以預冷PBS反復灌洗肺組織（0.5 mL/次，共兩次），收集BALF，低溫離心( 3500 rpm，10min )，取上清，保存于-20℃待測。細胞沉淀用0.2 mL預冷PBS重懸，吹打均勻后取10 μl于細胞計數(shù)板上在光學顯微鏡下計細胞總數(shù)，剩余細胞懸液涂片，用快速瑞姬氏染液染色，顯微鏡下進行細胞分類計數(shù)。
BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的測定  將獲得的BALF上清根據(jù)相關細胞因子檢測試劑盒的說明書進行各指標定量檢測，測定結果經(jīng)總蛋白含量校正。
肺組織中IL-4和IFN-γ的測定  將右側肺組織用預冷的PBS研磨得15 % 組織勻漿，低溫離心，3500 rpm，15min，取上清按照 ELISA 測定試劑盒的操作步驟進行IL-4和IFN-γ測定，并通過樣本總蛋白定量來進行校正。
肺組織HE及PAS染色  剪取左肺上葉，置10%中性福爾馬林中固定，石蠟包埋，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE及PAS染色，鏡下觀察肺組織炎性細胞浸潤及黏性蛋白增生情況。

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